Как правильно интерпретировать результаты тестов на COVID-19
Как правильно интерпретировать результаты тестов на COVID-19
17.05.2020
Текущая эпидемия вызвала особый интерес ученых, врачей и самих пациентов к лабораторным исследованиям новой инфекции. По понятным причинам, именно специалистам лабораторной медицины адресуются большинство вопросов, главными из которых являются – точность и достоверность, интерпретация и прогностическая ценность тестов на COVID-19.
В связи с большим числом подобных запросов, поступающих от врачей, Alfa Diagnostica на основе анализа актуальных мировых данных подготовила собственный обзор в виде вопросов и ответов, а именно: как правильно использовать и интерпретировать результаты тестов для диагностики COVID-19.
COVID-19
COronaVIrus Disease или болезнь, вызванная коронавирусом SARS-CoV-2.
Какие тесты используются для установления диагноза – COVID-19?
Тесты, выявляющие
Сам вирус (изоляция вируса) – в рутинной практике не применяются.
РНК вируса – секвенирование следующего поколения (NGS).
Чаще всего применяются тесты на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР).
Какие преимущества у ПЦР-тестов?
Высокая чувствительность.
Высокая специфичность.
Приемлемая скорость получения результатов (как правило, 1-2 рабочих дня).
Что влияет на точность и достоверность ПЦР-тестирования?
Сроки получения пробы (слишком раннее или позднее тестирование)
РНК SARS-CoV-2 обнаруживается в верхних дыхательных путях у большинства пациентов примерно за 48 часов до появления симптомов и приблизительно еще 2 недели после появления симптомов и, приблизительно 3 недели в нижних дыхательных путях, после чего, как правило, перестает определяться. Иногда РНК SARS-CoV-2 может продолжать обнаруживаться через 4-5-6 недель после появления симптомов (возможные причины – ошибка в тестировании, повторное инфицирование, реактивация).
Место взятия пробы
Следует учитывать, что чаще всего РНК SARS-CoV-2 обнаруживается в смывах из бронхоальвеолярного дерева (93%), реже – в мокроте (72%), в носу (63%) и кале (57%), и намного реже – в глотке (32%) случаев.
Качество забора биоматериала
Зависит от техники и используемых расходных материалов. Плохая техника взятия медицинским персоналом или получение пробы самостоятельно самим пациентом является самой частой причиной низкой эффективности исследования.
Характеристики используемой тест-системы (реагентов)
Важными характеристиками считаются: число детектируемых специфических РНК-мишений (>2) и порог обнаружения (<500 копий РНК/мл).
Любой из факторов и их комбинаций может привести к получению ложноотрицательных результатов (отрицательный результат теста при наличии вируса).
Если результат ПЦР-теста положительный?
Обнаружение (позитивность) РНК SARS-CoV-2 в пробе считается достаточным критерием для установления диагноза COVID-19 в контексте истории болезни и данных эпидемиологического анамнеза пациента.
Примечание:
Обнаружение РНК SARS-CoV-2 может не являться критерием жизнеспособности вируса или что, именно SARS-CoV-2 является причиной появления клинических симптомов (с целью исключения сопутствующей инфекции полезно провести ПЦР-диагностику вирусных инфекций - гриппа и респираторно-синцитиального вируса).
В-первую очередь, в динамике, позитивность снижается и исчезает в пробах из носоглотки, затем в пробах из мокроты и в последнюю очередь, из смывов, полученных после бронхоальвеолярного лаважа.
Вирусная нагрузка у бессимптомных пациентов, аналогична таковой у пациентов с симптомами, что свидетельствует о потенциальной передаче бессимптомных или минимально симптомных пациентов.
Вирус перестает обнаруживаться вирусологическими методами приблизительно через 10 дней после появления симптомов.
Если результат ПЦР-теста отрицательный?
Отсутствие (негативность) РНК SARS-CoV-2 в пробе считается достаточным критерием для исключения текущей инфекции SARS-CoV-2 в контексте истории болезни и данных эпидемиологического анамнеза пациента.
Примечание:
Отрицательный результат теста указывает, что РНК SARS-CoV-2 не присутствовала в исследуемой пробе выше предела обнаружения и/или в пробе присутствовали ингибиторы ПЦР.
Отрицательный результат не может полностью исключить инфицирование SARS-CoV-2 19, особенно, если исследовался биоматериал, полученный из носоглотки и/или на ранней стадии заболевания.
При отрицательном результате, но при сохранении подозрения на COVID-19, необходимо выполнить новый ПЦР-тест из того же биоматериала или другого биоматериала, но с потенциально более высокой вирусной нагрузкой (мокроты или смывов, полученных путем бронхоальвеолярного лаважа) и/или серологическое определение антител, в первую очередь, IgM.
С какими целями применяется тестирование на антитела к COVID-19?
Оценка адаптивного иммунного ответа организма на SARS-CoV-2 для эмпирической поддержки принятия клинических решений в диагностике и ведении пациентов с COVID-19.
Выявление бессимптомных лиц или пациентов с отрицательными результатами ПЦР, обусловленных очень низкой вирусной нагрузкой и невозможностью провести исследование биоматериала из нижних дыхательных путей.
Оценка иммунологического статуса (иммунитета) у пациентов, перенесших это заболевание. После разработки вакцины против COVID-19 приоритетными для вакцинации могут стать лица, у которых, по данным исследования антител, отсутствует иммунитет к SARS-CoV-2.
Эпидемиологическая оценка уровня инфицированности популяции SARS-CoV-2.
Следует ли использовать тесты на антитела для установления диагноза COVID-19?
Тесты на антитела не предназначены для подтверждения или исключения текущей инфекции SARS-CoV-2.
Какие тесты следует использовать для оценки адаптивного иммунного ответа на SARS-CoV-2?
Тесты, выявляющие антитела (иммуноглобулины) классов IgM, IgG, IgA к антигенам вируса.
Какие методы используются для обнаружения антител к SARS-CoV-2?
Иммунохроматографический анализ (реализован в рапид-тест-системах, многие из которых обладают невысокими (или сомнительными) диагностическими характеристиками.
Хемилюминисцентный анализ (требуется специальное аналитическое оборудование, высокие достоверность и стоимость).
Иммуноферментный анализ (высокая достоверность, приемлемая стоимость).
Чаще всего применяются тесты на основе иммуноферментного анализа (ИФА).
Какими могут быть результаты серологического исследования на антитела?
Если результат теста на антитела IgG положительный?
Предшествующее или продолжающееся инфицирование.
Примечание:
Для достижения обнаруживаемых уровней IgG требуется, в среднем, 10-14 дней после появления симптомов (зависит от индивидуальных особенностей, вирусной нагрузки и т.п.).
Пиковая концентрация антител регистрируется через 20 дней после появления симптомов.
Сроки циркуляции IgG в крови сегодня точно не известны по объективным причинам.
Некоторые лица не генерируют IgG вследствие иммуносупрессии и/или других причин.
Связь между позитивностью IgG и иммунитетом к SARS-CoV-2 еще не установлена.
Лучшую чувствительность демонстрируют тест-системы, использующие в качестве твердой фазы антигены N (Nucleocapsid) и S (Spike), чем тест-системы, использующие только один из антигенов.
Если результат теста на антитела IgG отрицательный?
Антитела IgG к SARS-CoV-2 не присутствует на уровне, который можно обнаружить с помощью системы для иммуноанализа.
Тестирование проведено в слишком ранние сроки.
Не исключается инфицирование, особенно лиц, имевших контакты с инфицированными SARS-CoV-2.
Если результат теста на антитела IgG пограничный?
Антитела IgG к SARS-CoV-2 присутствуют на уровне или близко к порогу предела обнаружения системой для иммуноанализа.
Повторное тестирование через 1-2 недели.
Если результат теста на антитела IgM и/или IgA положительный?
Активная репликация (размножение) вируса в текущий момент времени.
Примечание:
Для достижения обнаруживаемых уровней IgM/A требуется, в среднем, 3-6 дней после появления симптомов (зависит от индивидуальных особенностей, вирусной нагрузки и т.п.).
Пиковая концентрация антител регистрируется через 5-12 дней после появления симптомов.
Сроки циркуляции IgM/A в крови составляют приблизительно 3 недели, окончательно не установлены.
Некоторые лица не генерируют IgM/A вследствие иммуносупрессии и/или других причин.
Лучшую чувствительность демонстрируют тест-системы, во-первых, определяющие суммарные антитела A и M, во-вторых, использующие в качестве твердой фазы антигены N (Nucleocapsid) и S (Spike), чем тест-системы, использующие только один из антигенов.
Чувствительность определения IgM выше чувствительности определения РНК SARS-CoV-2 через 5-6 дней после появления симптомов.
Если результат теста на антитела IgM и/или IgA отрицательный?
Антитела IgM/A к SARS-CoV-2 не присутствуют на уровне, который можно обнаружить с помощью тест-системы для иммуноанализа.
Тестирование проведено в слишком ранние сроки.
Не исключается инфицирование, особенно лиц, имевших контакты с инфицированными SARS-CoV-2.
Если результат теста на антитела IgM и/или IgA пограничный?
Антитела IgM и/или IgA к SARS-CoV-2 присутствуют на уровне или близко к порогу предела обнаружения системой для иммуноанализа.
Повторное тестирование через 1-2 недели.
Существует ли перекрестная реактивность между антителами к SARS-CoV-2 и другими коронавирусами?
Анализ панелей образцов крови, сданных в 2010, 2017 и 2019 годах показывает, что в очень редких случаях (<1%), возможны ложноположительные результаты вследствие перекрестных реакций с эндемичными (сезонными) штаммами коронавируса (HKU1, NL63, OC43, 229E).
Формируется ли иммунитет у пациентов после перенесенной инфекции?
Неизвестно, на сегодняшний день однозначного ответа на этот вопрос не существует.
В отношении SARS-CoV было показано, что IgG обеспечивают иммунитет на срок до 2 лет.
Как правильно интерпретировать результаты молекулярных и серологических тестов?
Сочетанное использование методов молекулярной и серологической диагностики существенно улучшает диагностику.
Интерпретировать результаты следует всегда в контексте истории болезни и данных эпидемиологического анамнеза пациента.
Результаты тестов
Лабораторное заключение
РНК
IgM
IgG
+
–
–
Ранняя (начальная) стадия инфекции.
+
+
–
Активная фаза инфекции.
+
+
+
Активная фаза инфекции и формирование адаптивного иммунитета.
+
–
+
Поздняя стадия инфекции.
–
+
–
Ранняя стадия инфекции. Возможен ложноотрицательный результат ПЦР.
–
–
+
Рековалесценция.
–
+
+
Активная фаза инфекции. Возможен ложноотрицательный результат ПЦР.
Рекомендации подготовлены А.Мереуца
Как правильно интерпретировать результаты тестов на COVID-19 - Заголовок сайта