загрузка ...
Как правильно интерпретировать результаты тестов на COVID-19

Как правильно интерпретировать результаты тестов на COVID-19

17.05.2020
Текущая эпидемия вызвала особый интерес ученых, врачей и самих пациентов к лабораторным исследованиям новой инфекции. По понятным причинам, именно специалистам лабораторной медицины адресуются большинство вопросов, главными из которых являются – точность и достоверность, интерпретация и прогностическая ценность тестов на COVID-19.
 
В связи с большим числом подобных запросов, поступающих от врачей, Alfa Diagnostica на основе анализа актуальных мировых данных подготовила собственный обзор в виде вопросов и ответов, а именно: как правильно использовать и интерпретировать результаты тестов для диагностики COVID-19.
 
COVID-19
  • COronaVIrus Disease или болезнь, вызванная коронавирусом SARS-CoV-2.
Какие тесты используются для установления диагноза – COVID-19?
Тесты, выявляющие
  • Сам вирус (изоляция вируса) – в рутинной практике не применяются.
  • Белковый компонент вируса (антиген) – иммунохроматография (рапид-тесты).
  • Фрагмент РНК вируса – полимеразная цепная реакция (ПЦР). 
  • РНК вируса – секвенирование следующего поколения (NGS).
Чаще всего применяются тесты на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР).
 
Какие преимущества у ПЦР-тестов?
  • Высокая чувствительность.
  • Высокая специфичность.
  • Приемлемая скорость получения результатов (как правило, 1-2 рабочих дня).
Что влияет на точность и достоверность ПЦР-тестирования?
  • Сроки получения пробы (слишком раннее или позднее тестирование)
РНК SARS-CoV-2 обнаруживается в верхних дыхательных путях у большинства пациентов примерно за 48 часов до появления симптомов и приблизительно еще 2 недели после появления симптомов и, приблизительно 3 недели в нижних дыхательных путях, после чего, как правило, перестает определяться. Иногда РНК SARS-CoV-2 может продолжать обнаруживаться через 4-5-6 недель после появления симптомов (возможные причины – ошибка в тестировании, повторное инфицирование, реактивация).   
  • Место взятия пробы
Следует учитывать, что чаще всего РНК SARS-CoV-2 обнаруживается в смывах из бронхоальвеолярного дерева (93%), реже – в мокроте (72%), в носу (63%) и кале (57%), и намного реже – в глотке (32%) случаев.
  • Качество забора биоматериала
Зависит от техники и используемых расходных материалов. Плохая техника взятия медицинским персоналом или получение пробы самостоятельно самим пациентом является самой частой причиной низкой эффективности исследования.
  • Характеристики используемой тест-системы (реагентов)
Важными характеристиками считаются: число детектируемых специфических РНК-мишений (>2) и порог обнаружения (<500 копий РНК/мл).
 
Любой из факторов и их комбинаций может привести к получению ложноотрицательных результатов (отрицательный результат теста при наличии вируса).
 
Если результат ПЦР-теста положительный?
  • Обнаружение (позитивность) РНК SARS-CoV-2 в пробе считается достаточным критерием для установления диагноза COVID-19 в контексте истории болезни и данных эпидемиологического анамнеза пациента.
Примечание:
  • Обнаружение РНК SARS-CoV-2 может не являться критерием жизнеспособности вируса или что, именно SARS-CoV-2 является причиной появления клинических симптомов (с целью исключения сопутствующей инфекции полезно провести ПЦР-диагностику вирусных инфекций - гриппа и респираторно-синцитиального вируса).
  • В-первую очередь, в динамике, позитивность снижается и исчезает в пробах из носоглотки, затем в пробах из мокроты и в последнюю очередь, из смывов, полученных после бронхоальвеолярного лаважа.
  • Вирусная нагрузка у бессимптомных пациентов, аналогична таковой у пациентов с симптомами, что свидетельствует о потенциальной передаче бессимптомных или минимально симптомных пациентов.
  • Вирус перестает обнаруживаться вирусологическими методами приблизительно через 10 дней после появления симптомов.
Если результат ПЦР-теста отрицательный?
  • Отсутствие (негативность) РНК SARS-CoV-2 в пробе считается достаточным критерием для исключения текущей инфекции SARS-CoV-2 в контексте истории болезни и данных эпидемиологического анамнеза пациента. 
Примечание:
  • Отрицательный результат теста указывает, что РНК SARS-CoV-2 не присутствовала в исследуемой пробе выше предела обнаружения и/или в пробе присутствовали ингибиторы ПЦР.
  • Отрицательный результат не может полностью исключить инфицирование SARS-CoV-2 19, особенно, если исследовался биоматериал, полученный из носоглотки и/или на ранней стадии заболевания.
  • При отрицательном результате, но при сохранении подозрения на COVID-19, необходимо выполнить новый ПЦР-тест из того же биоматериала или другого биоматериала, но с потенциально более высокой вирусной нагрузкой (мокроты или смывов, полученных путем бронхоальвеолярного лаважа) и/или серологическое определение антител, в первую очередь, IgM.
С какими целями применяется тестирование на антитела к COVID-19?
  • Оценка адаптивного иммунного ответа организма на SARS-CoV-2 для эмпирической поддержки принятия клинических решений в диагностике и ведении пациентов с COVID-19.
  • Выявление бессимптомных лиц или пациентов с отрицательными результатами ПЦР, обусловленных очень низкой вирусной нагрузкой и невозможностью провести исследование биоматериала из нижних дыхательных путей.
  • Оценка иммунологического статуса (иммунитета) у пациентов, перенесших это заболевание. После разработки вакцины против COVID-19 приоритетными для вакцинации могут стать лица, у которых, по данным исследования антител, отсутствует иммунитет к SARS-CoV-2.
  • Эпидемиологическая оценка уровня инфицированности популяции SARS-CoV-2.
  • Выявление/скрининг потенциальных высокореактивных доноров плазмы (COVID-19 рековалесцентов).
Следует ли использовать тесты на антитела для установления диагноза COVID-19?
  • Тесты на антитела не предназначены для подтверждения или исключения текущей инфекции SARS-CoV-2.
Какие тесты следует использовать для оценки адаптивного иммунного ответа на SARS-CoV-2?
  • Тесты, выявляющие антитела (иммуноглобулины) классов IgM, IgG, IgA к антигенам вируса.
Какие методы используются для обнаружения антител к SARS-CoV-2?
  • Иммунохроматографический анализ (реализован в рапид-тест-системах, многие из которых обладают невысокими (или сомнительными) диагностическими характеристиками.
  • Хемилюминисцентный анализ (требуется специальное аналитическое оборудование, высокие достоверность и стоимость).
  • Иммуноферментный анализ (высокая достоверность, приемлемая стоимость).
Чаще всего применяются тесты на основе иммуноферментного анализа (ИФА).
 
Какими могут быть результаты серологического исследования на антитела?
  • Положительными (реактивными), отрицательными (нереактивными), пограничными (двусмысленными).
Если результат теста на антитела IgG положительный?
  • Предшествующее или продолжающееся инфицирование. 
Примечание:
  • Для достижения обнаруживаемых уровней IgG требуется, в среднем, 10-14 дней после появления симптомов (зависит от индивидуальных особенностей, вирусной нагрузки и т.п.).
  • Пиковая концентрация антител регистрируется через 20 дней после появления симптомов.
  • Сроки циркуляции IgG в крови сегодня точно не известны по объективным причинам.
  • Некоторые лица не генерируют IgG вследствие иммуносупрессии и/или других причин.  
  • Связь между позитивностью IgG и иммунитетом к SARS-CoV-2 еще не установлена.
  • Лучшую чувствительность демонстрируют тест-системы, использующие в качестве твердой фазы антигены N (Nucleocapsid) и S (Spike), чем тест-системы, использующие только один из антигенов.  
Если результат теста на антитела IgG отрицательный?
  • Антитела IgG к SARS-CoV-2 не присутствует на уровне, который можно обнаружить с помощью системы для иммуноанализа.
  • Тестирование проведено в слишком ранние сроки.
  • Не исключается инфицирование, особенно лиц, имевших контакты с инфицированными SARS-CoV-2.
Если результат теста на антитела IgG пограничный?
  • Антитела IgG к SARS-CoV-2 присутствуют на уровне или близко к порогу предела обнаружения системой для иммуноанализа.
  • Повторное тестирование через 1-2 недели.
Если результат теста на антитела IgM и/или IgA положительный?
  • Активная репликация (размножение) вируса в текущий момент времени.
Примечание:
  • Для достижения обнаруживаемых уровней IgM/A требуется, в среднем, 3-6 дней после появления симптомов (зависит от индивидуальных особенностей, вирусной нагрузки и т.п.).
  • Пиковая концентрация антител регистрируется через 5-12 дней после появления симптомов.
  • Сроки циркуляции IgM/A в крови составляют приблизительно 3 недели, окончательно не установлены.
  • Некоторые лица не генерируют IgM/A вследствие иммуносупрессии и/или других причин.  
  • Лучшую чувствительность демонстрируют тест-системы, во-первых, определяющие суммарные антитела A и M, во-вторых, использующие в качестве твердой фазы антигены N (Nucleocapsid) и S (Spike), чем тест-системы, использующие только один из антигенов.  
  • Чувствительность определения IgM выше чувствительности определения РНК SARS-CoV-2 через 5-6 дней после появления симптомов.
Если результат теста на антитела IgM и/или IgA отрицательный?
  • Антитела IgM/A к SARS-CoV-2 не присутствуют на уровне, который можно обнаружить с помощью тест-системы для иммуноанализа.
  • Тестирование проведено в слишком ранние сроки.
  • Не исключается инфицирование, особенно лиц, имевших контакты с инфицированными SARS-CoV-2.
Если результат теста на антитела IgM и/или IgA пограничный?
  • Антитела IgM и/или IgA к SARS-CoV-2 присутствуют на уровне или близко к порогу предела обнаружения системой для иммуноанализа.
  • Повторное тестирование через 1-2 недели.
Существует ли перекрестная реактивность между антителами к SARS-CoV-2 и другими коронавирусами?
  • Анализ панелей образцов крови, сданных в 2010, 2017 и 2019 годах показывает, что в очень редких случаях (<1%), возможны ложноположительные результаты вследствие перекрестных реакций с эндемичными (сезонными) штаммами коронавируса (HKU1, NL63, OC43, 229E).
Формируется ли иммунитет у пациентов после перенесенной инфекции?
  • Неизвестно, на сегодняшний день однозначного ответа на этот вопрос не существует.
  • В отношении SARS-CoV было показано, что IgG обеспечивают иммунитет на срок до 2 лет.
Как правильно интерпретировать результаты молекулярных и серологических тестов?
  • Сочетанное использование методов молекулярной и серологической диагностики существенно улучшает диагностику.
  • Интерпретировать результаты следует всегда в контексте истории болезни и данных эпидемиологического анамнеза пациента.
Результаты тестовЛабораторное заключение
РНКIgMIgG 
+ Ранняя (начальная) стадия инфекции.
++ Активная фаза инфекции.
+++ Активная фаза инфекции и формирование адаптивного иммунитета.
++ Поздняя стадия инфекции.
+ Ранняя стадия инфекции. Возможен ложноотрицательный результат ПЦР.
+ Рековалесценция.
++ Активная фаза инфекции. Возможен ложноотрицательный результат ПЦР.
 
 
Рекомендации подготовлены А.Мереуца

Как правильно интерпретировать результаты тестов на COVID-19 - Заголовок сайта

keymeta

,keymeta

descmeta

descmeta